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高鹽病毒制備難題：如何高效去除宿主細(xì)胞核酸？
核酸酶能夠有效去除各種形式的DNA和RNA，是去除宿主細(xì)胞核酸（HostCell DNA，HCD）的理想手段。但來自粘質(zhì)沙雷氏菌的全能核酸酶（如Pannarase、Benzonase等產(chǎn)品）最適Na+/ K+鹽濃度在0-20mM，有效范圍在0-150mM。多應(yīng)用于中低鹽濃度的HCD去除。
如果在病毒制備中遇到高鹽條件，怎么更好的去除宿主細(xì)胞核酸？
在高鹽環(huán)境下，不僅可以抑制病毒載體聚集、提升產(chǎn)量。因此，在有的病毒制備工藝中，常采用高鹽方法進(jìn)行細(xì)胞裂解來代替凍融裂解，釋放的病毒載滴度上會有提升。另外，高鹽環(huán)境下，核酸酶去除HCD在工藝上比一步層析或一部超濾更具效率，核酸酶做到更好的特異性，產(chǎn)品回收率更高，且避免了層析和超濾裝置的污染。
如果在下游純化中遇到高鹽條件，怎么更好的去除宿主細(xì)胞核酸？
在下游純化環(huán)節(jié)，如果遇到高鹽洗脫的層析樣品中的HCD含量偏高，需要采取相應(yīng)措施，通常是在層析后再利用核酸酶去除一次HCD。然而市面上的大多數(shù)全能核酸酶并不耐鹽，高鹽環(huán)境下就會失活，酶切效果大大降低。因此，選擇耐高鹽全能核酸酶是一個比較機智的方法。
逐典Pannarase耐高鹽全能核酸酶
Pannarase耐高鹽全能核酸酶是一種非特異性核酸內(nèi)切酶，可以將任何形式的DNA和RNA(線性、環(huán)形、超螺旋)降解成3’-單核苷酸及二核苷酸，并可在寬泛的鹽濃度和偏堿性pH操作條件下保持高效性。
所謂“工欲善其事，必先利其器”，逐典Pannarase耐高鹽全能核酸酶符合GMP要求，專門為高鹽狀態(tài)下樣品的HCD去除設(shè)計，降低工藝難度，提升生產(chǎn)效率。
逐典Pannarase耐高鹽全能核酸酶優(yōu)勢
1，無動物源性,無氨芐青霉素、嚴(yán)格的內(nèi)毒控制
2，先進(jìn)的生產(chǎn)工藝，非傳統(tǒng)His標(biāo)簽純化、排除，引入金屬離子風(fēng)險位
3，嚴(yán)格的質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)，確保單位酶活的、準(zhǔn)確性以及批次間穩(wěn)定性
4，更高的鹽耐受性(0-500mMNaCI)、寬泛的pH范圍(7.0-11.0)
Pannarase在150 mM Na+濃度條件下酶活性最高
圖1.Pannarase耐高鹽全能核酸酶耐鹽曲線
圖2.Pannarase耐高鹽全能核酸酶酶切數(shù)據(jù)
實驗數(shù)據(jù)：
非還原及還原的SDS-PAGE顯示蛋白分子量約16kDa，未見雜蛋白
尺寸排陽色譜顯示高純度，無聚焦體產(chǎn)牛
