2021-2023年我國(guó)真菌毒素檢測(cè)市場(chǎng)分析

2023.5.22

　　真菌毒素是嚴(yán)重危害人類健康和食品質(zhì)量安全的一類天然毒素。我國(guó)對(duì)真菌毒素污染管控嚴(yán)格，先后四次頒布了食品中真菌毒素污染限量的強(qiáng)制性標(biāo)準(zhǔn)（GB 2761）。根據(jù)GB/T 5009，真菌毒素的主要檢測(cè)方法是液質(zhì)聯(lián)用法（GC-MS）、液相色譜法（HPLC）、酶聯(lián)免疫、薄層色譜法等；而一些行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)和快檢標(biāo)準(zhǔn)（KJ）又增加了膠體金免疫層析技術(shù)和時(shí)間分辯熒光免疫層析法等基于免疫檢測(cè)的快速檢測(cè)方法。免疫檢測(cè)被廣泛應(yīng)用于市場(chǎng)監(jiān)管和企業(yè)自檢的第一道安全防線，滿足現(xiàn)場(chǎng)快速篩查，市場(chǎng)需求極大。本文中，我們重點(diǎn)對(duì)2021~2023年我國(guó)真菌毒素檢測(cè)市場(chǎng)主要快速檢測(cè)技術(shù)進(jìn)行分析和展示，幫助廣大用戶了解我國(guó)真菌毒素檢測(cè)技術(shù)及產(chǎn)品特點(diǎn)，也為客戶采購(gòu)提供參考。

真菌毒素的概述

真菌毒素的種類

圖1 黃曲霉毒素形態(tài)圖

　　真菌毒素（Mycotoxin）一詞源于希臘語(yǔ)“Mykes”和拉丁語(yǔ)“Toxicum”，它是由產(chǎn)毒真菌在適宜的條件下產(chǎn)生的有毒代謝產(chǎn)物。而真菌是以產(chǎn)生孢子的方式繁殖的真核生物。我們常聽(tīng)到、看到的“霉菌”并不是分類學(xué)上的名稱，是菌絲體發(fā)達(dá)而又不形成較大子實(shí)體的一部分真菌的俗稱。國(guó)內(nèi)重點(diǎn)監(jiān)管的真菌毒素主要包括黃曲霉毒素 B₁、B₂、G₁、G₂（Aflatoxins，AFB₁/ AFB₂/ AFG₁/ AFG₂）、脫氧雪腐鐮刀菌烯醇[Deoxynivalenol，DON，又稱嘔吐毒素（vomintoxin）]、玉米赤霉烯酮（Zearalenone，ZEN）、赭曲霉毒素A（Ochratoxin A，OTA）、T-2毒素（T-2 toxin）、展青霉素、伏馬菌素等。隨著技術(shù)的進(jìn)步，而更多的真菌毒素的危害和檢測(cè)方法也引起人們的關(guān)注，如鉸鏈孢毒素等。動(dòng)物食用被真菌毒素污染的飼料后，動(dòng)物源性食品（如肉、奶、蛋）中就會(huì)含有對(duì)應(yīng)真菌毒素的代謝物，最著名的是黃曲霉毒素B₁的代謝物黃曲霉毒素M₁。

真菌毒素污染的危害

　　真菌毒素污染是天然存在而不是人為作用的結(jié)果。據(jù)FAO報(bào)告，全球每年約有25%的農(nóng)作物遭受真菌毒素的污染，其中2%的農(nóng)作物因污染嚴(yán)重而完全失去營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值，由此造成的直接或間接經(jīng)濟(jì)損失達(dá)到數(shù)百億美元。

圖2 被黃曲霉毒素污染了玉米

　　真菌毒素常見(jiàn)暴露途徑是被污染的食品或飼料，被人或動(dòng)物攝取。黃曲霉毒素因污染最為廣泛、對(duì)機(jī)體的危害最大而備受社會(huì)關(guān)注。1993年，黃曲霉毒素被世界衛(wèi)生組織（WHO）的癌癥研究機(jī)構(gòu)（IARC）劃定為Ι類致癌物。

　　受氣候、貯藏條件等的影響，我國(guó)是世界上被真菌毒素污染最嚴(yán)重的國(guó)家之一。我國(guó)每年因霉變而導(dǎo)致2500多噸糧食不能食用，出口糧食由于真菌毒素超過(guò)輸入國(guó)限量標(biāo)準(zhǔn)而遭警告或降低等級(jí)的現(xiàn)象時(shí)有發(fā)生。

　　真菌毒素不會(huì)輕易消失。用污染了的糧食加工成食品或飼料后依然含有真菌毒素；食用了被真菌毒素污染飼料的畜禽產(chǎn)生的動(dòng)物源性食品，會(huì)含有真菌毒素代謝物。脫毒也是真菌毒素研究領(lǐng)域的一個(gè)重要分支。真菌毒素暴露會(huì)引發(fā)急性或慢性疾?。ㄈ绨┌Y）。需要強(qiáng)調(diào)的，食品單一而導(dǎo)致的長(zhǎng)期低水平暴露不容忽視。

真菌毒素的限量標(biāo)準(zhǔn)

　　真菌毒素的危害已引起世界各國(guó)的重視，目前已有100多個(gè)國(guó)家/組織規(guī)定了食品中真菌毒素的限量。真菌毒素限量的設(shè)置與各國(guó)的經(jīng)濟(jì)發(fā)展水平及經(jīng)濟(jì)利益密切相關(guān)，是國(guó)際農(nóng)產(chǎn)品貿(mào)易壁壘之一。一般來(lái)說(shuō)，發(fā)達(dá)國(guó)家對(duì)真菌毒素限量水平要求極為嚴(yán)格，覆蓋種類也更為豐富；而發(fā)展中國(guó)家設(shè)立的真菌毒素限量大多較為寬松，種類比較單一，一些落后國(guó)家甚至沒(méi)有限量要求。對(duì)真菌毒素限量的強(qiáng)制性限定有助于推動(dòng)真菌毒素檢測(cè)方法的發(fā)展。

　　我國(guó)在曾多次頒布食品中真菌毒素限量的強(qiáng)制性標(biāo)準(zhǔn)：GB 2761-1985、GB 2761-2005、GB 2761-2011及GB 2761-2017，規(guī)定部分真菌毒素在不同食品的限量。從1985年版只規(guī)定黃曲霉毒素到2017年對(duì)六大真菌毒素做出限量規(guī)定，而在正在修訂的GB2761征求意見(jiàn)稿中，又增加了伏馬毒素的限量。在GB 2761-2017中，將食品分為22大類，每大類下分為若干亞類，依次分為次亞類、小類等。國(guó)際上將常見(jiàn)的食品污染物在各種食品中的限量要求，統(tǒng)一制定公布為食品污染物限量通用標(biāo)準(zhǔn)。如CAC制定公布的《食品和飼料中污染物和毒素通用標(biāo)準(zhǔn)》，涉及食品污染物、毒素和放射性核素限量規(guī)定；歐盟委員會(huì)No 1881/2006指令，規(guī)定了食品中特定污染物（含真菌毒素）限量；澳新食品標(biāo)準(zhǔn)局公布的《食品法典標(biāo)準(zhǔn)》的1.4.1《污染物及天然毒素》中規(guī)定了特定的金屬和非金屬污染物、天然毒素限量。而我國(guó)對(duì)真菌毒素污染與食品其他污染分別在不同標(biāo)準(zhǔn)中做了限定，一定程度上，反映了我國(guó)對(duì)真菌毒素污染的重視。

真菌毒素的檢測(cè)市場(chǎng)

　　據(jù)Mordor Intelligence預(yù)測(cè)，真菌毒素全球檢測(cè)市場(chǎng)在未來(lái)11年內(nèi)以7.5%的復(fù)合年增長(zhǎng)率增長(zhǎng)，而亞太地區(qū)在2018年至2028年期間以最高的復(fù)合年增長(zhǎng)率增長(zhǎng)。北美在 2021 年的市場(chǎng)份額最高。根據(jù)EMR預(yù)測(cè)，預(yù)計(jì)在2023-2028年期間，全球霉菌毒素檢測(cè)市場(chǎng)預(yù)計(jì)將以7.8%的CAGR值增長(zhǎng)，到2026年將達(dá)到15.4億美元。

　　全球真菌毒素檢測(cè)市場(chǎng)份額占比最高是色質(zhì)聯(lián)用法（LC-MS/GC-MS），其次是免疫分析方法，高效液相色譜（HPLC）法排名第三。

圖3 真菌毒素毒素檢測(cè)市場(chǎng)占比情況

真菌毒素的主要檢測(cè)技術(shù)

　　真菌毒素檢測(cè)技術(shù)主要包括以現(xiàn)代色譜、色質(zhì)聯(lián)用法為代表的儀器分析方法及免疫檢測(cè)為代表的快檢方法等。其中，高效液相色譜法又包括柱前衍生和柱后衍生。在儀器分析前要進(jìn)行待測(cè)物的提取，我們就先從樣本前處理開(kāi)始，詳細(xì)介紹真菌毒素檢測(cè)市場(chǎng)的主要方法。

　　由于一種作物（食品）可能被多種真菌毒素污染, 因此實(shí)現(xiàn)對(duì)多種真菌毒素同時(shí)檢測(cè)或凈化的技術(shù)具有很高的應(yīng)用價(jià)值。雖然真菌毒素的污染具有樣品選擇性，但真菌毒素種類繁多，污染對(duì)象包括谷物、飼料、果蔬、加工食品、調(diào)料和中藥材。

樣本前處理

　?。?）各類凈化柱

　　在樣本前處理的凈化過(guò)程中，需要用到各種凈化柱提取待測(cè)物，主要有固相萃取柱（SPE）、免疫親和柱（IAC）和多功能凈化柱。為滿足實(shí)際監(jiān)測(cè)需要，目前的凈化柱由凈化一種或一類真菌毒素向多種類凈化發(fā)展。近年來(lái)IAC在國(guó)際和國(guó)內(nèi)都比較熱門(mén)，是美國(guó)分析化學(xué)家協(xié)會(huì)（AOAC）、國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)化組織（ISO）、歐盟標(biāo)準(zhǔn)（EN）及我國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)（GB）主要推薦的前處理方法。

圖4 免疫親和柱的凈化流程

　　食品或飼料樣品基質(zhì)復(fù)雜，按照萃取的辦法提取，步驟繁瑣，時(shí)間長(zhǎng)，而且提取效率不高。而免疫親和柱依據(jù)抗原-抗體結(jié)合原理，樣品溶液先過(guò)柱，再清洗、洗脫，可以獲得凈化效果很好的目標(biāo)分析物溶液，極大的提高了檢測(cè)效率，并具有環(huán)境友好性。提取的分析物可直接用于儀器檢測(cè)。

　　國(guó)內(nèi)IAC市場(chǎng)最初主要是由中檢維康代理的VICAM壟斷，在產(chǎn)品市場(chǎng)化的進(jìn)程中，中檢維康推動(dòng)了免疫親和柱聯(lián)用HPLC檢測(cè)的各類標(biāo)準(zhǔn)的制定。后來(lái)由北京華安麥科率先打破了國(guó)外產(chǎn)品的壟斷，成功開(kāi)發(fā)了IAC柱和多種類的凈化柱（如ToxinFast@真菌毒素多功能凈化柱），其他如普瑞邦、伊萊莎、易瑞、中檢維康、蘇微、維德維康、勤邦等國(guó)內(nèi)企業(yè)都開(kāi)始柱子的研發(fā)和生產(chǎn)。IAC柱要用到大量的單克隆抗體，生產(chǎn)IAC柱的企業(yè)要維護(hù)成本就需要有生產(chǎn)單抗的能力和設(shè)備，即需要有SPF級(jí)動(dòng)物房、細(xì)胞培養(yǎng)室等。國(guó)內(nèi)的一些科研院所，也關(guān)注真菌毒素多功能凈化柱的研究，北京農(nóng)林科學(xué)院質(zhì)標(biāo)所的王蒙研究員研制出3種高通量快速凈化農(nóng)產(chǎn)品中真菌毒素的前處理凈化柱，并提出“一步凈化”理論，使檢測(cè)時(shí)間縮短了75%，成本降低了約80%。

圖5 普瑞邦生產(chǎn)的各類免疫親和柱

圖6 深圳易瑞生產(chǎn)的黃曲霉毒素B₁/B₂/G₁/G₂凈化柱

　?。?）自動(dòng)化前處理設(shè)備

　　自動(dòng)化前處理設(shè)備的技術(shù)原理，一些是基于固相萃取技術(shù)，另一些是基于免疫磁珠分離技術(shù)。免疫磁珠分離技術(shù)在上世紀(jì)末開(kāi)始從應(yīng)用研究走向產(chǎn)業(yè)化，并在近年來(lái)得到廣泛的應(yīng)用。它是將免疫學(xué)反應(yīng)的高度特異性與磁珠特有的磁響應(yīng)性相結(jié)合，是一種特異性強(qiáng)、純化度高的免疫學(xué)檢測(cè)方法和抗原純化手段。

　　國(guó)內(nèi)的一些企業(yè)，分別推出了自動(dòng)化前處理設(shè)備，如中檢維康推出免疫磁珠自動(dòng)工作站、普敦科技的全自動(dòng)磁性固相萃取儀、萊伯泰科的SPE 1000全自動(dòng)固相萃取系統(tǒng)等，都可用于真菌毒素污染樣本的前處理。因?yàn)槊糠N樣品可能被不同的真菌毒素污染，所以前處理過(guò)程的統(tǒng)一是真菌毒素檢測(cè)的發(fā)展趨勢(shì)。

圖7 中檢維康的免疫磁珠自動(dòng)工作站

真菌毒素的儀器分析方法

　　在快檢技術(shù)得到充分發(fā)展和應(yīng)用的今天，儀器分析作為具有一種法檢手段，在真菌毒素污染的確證實(shí)驗(yàn)中具有不可替代的作用。

　　根據(jù)GB 2761，大多數(shù)真菌毒素的檢測(cè)限量是ng級(jí)的，對(duì)檢測(cè)儀器沒(méi)有特殊的要求，常規(guī)的熒光（或紫外）檢測(cè)器即可滿足限量要求。黃曲霉毒素是毒性最強(qiáng)的毒素，檢測(cè)限量也是最低的?；贖PLC的分析中，檢測(cè)黃曲霉毒素一般需要使用光學(xué)衍生器增加待測(cè)物的熒光信號(hào)，以獲得更為靈敏的檢測(cè)結(jié)果。因此，專注真菌毒素檢測(cè)試劑或設(shè)備的公司，常會(huì)生產(chǎn)或銷售光學(xué)衍生器。液相色譜配置的檢測(cè)器價(jià)格相對(duì)便宜，可以滿足基層或常規(guī)檢測(cè)的需求。

圖8 CLOVER光化學(xué)柱后衍生器

　　液質(zhì)聯(lián)用儀可以實(shí)現(xiàn)更加準(zhǔn)確的定量分析，而且可以作為非定向篩查的手段，發(fā)現(xiàn)更多類型的毒素污染。此外，液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)可以同時(shí)檢測(cè)多種真菌毒素污染，一些行標(biāo)都推薦了液相串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)谷物或飼料中多種真菌毒素的方法。

　　能夠應(yīng)用于真菌毒素液相色譜檢測(cè)的主要品牌：沃特世、安捷倫、島津、賽默飛、珀金埃爾默等，國(guó)內(nèi)有華譜科儀等。

　　能夠應(yīng)用于真菌毒素液質(zhì)檢測(cè)的主要品牌有賽默飛、安捷倫、島津、沃特世、珀金埃爾默和SCIEX等。

真菌毒素免疫檢測(cè)技術(shù)及應(yīng)用

　?。?）免疫檢測(cè)技術(shù)概述

　　免疫檢測(cè)試劑是根據(jù)抗原-抗體競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合原理開(kāi)發(fā)的定量或定性快檢產(chǎn)品。根據(jù)現(xiàn)行的《食品安全法》, 國(guó)家認(rèn)可的快檢方法可以作為執(zhí)法依據(jù)，由此極大縮減了檢測(cè)時(shí)間和提高了監(jiān)管效率。早在2008年，由江蘇省微生物所有限責(zé)任公司起草的GB/T 17480推薦了酶聯(lián)免疫吸附法用于飼料黃曲霉毒素B1污染的檢測(cè)；而GB 5009.22（24）-2106把酶聯(lián)免疫吸附篩查法作為檢測(cè)黃曲霉毒素B族和G族（M族）的標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法。糧食行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)在2015年將膠體金定量檢測(cè)技術(shù)納入標(biāo)準(zhǔn)中，而且即將頒布實(shí)施一系列時(shí)間分辨熒光免疫層析定量法。國(guó)家食藥局于2017年、2019年和2022年先后頒布了8個(gè)真菌毒素的快檢標(biāo)準(zhǔn), 包括不同食品中嘔吐毒素、黃曲霉毒素B1和M1、玉米赤霉烯酮、赭曲霉毒素、T-2毒素、伏馬毒素的膠體金免疫層析法。這些都為免疫層析技術(shù)及產(chǎn)品在農(nóng)業(yè)、糧油、食藥行業(yè)的應(yīng)用提供了技術(shù)保障和標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)，滿足田間、倉(cāng)儲(chǔ)、流通環(huán)節(jié)等現(xiàn)場(chǎng)快速篩查需要, 有效保障了這些領(lǐng)域真菌毒素污染的監(jiān)管和檢測(cè), 在檢測(cè)方法上實(shí)現(xiàn)了歐美國(guó)家同步。相信隨著我國(guó)免疫層析技術(shù)的發(fā)展進(jìn)步，有一天會(huì)登堂入室，躋身國(guó)標(biāo)檢測(cè)方法的。

　　按照技術(shù)出現(xiàn)的時(shí)間順序，真菌毒素快檢產(chǎn)品體系主要包括酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒、膠體金檢測(cè)卡（試紙條）和時(shí)間分辨熒光定量檢測(cè)卡等。我國(guó)曾經(jīng)有一批只專注于真菌毒素檢測(cè)試劑研發(fā)生產(chǎn)的企業(yè)，雖然目前無(wú)一不在拓寬檢測(cè)領(lǐng)域，以應(yīng)對(duì)更為復(fù)雜的市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)，但也在一定程度上說(shuō)明真菌毒素檢測(cè)在我國(guó)的規(guī)模化。

　　（2）酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒

　　近些年，酶聯(lián)免疫試劑盒在食品質(zhì)量安全檢測(cè)領(lǐng)域的應(yīng)用在縮減。究其原因是酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)對(duì)實(shí)驗(yàn)操作要求相對(duì)較高、費(fèi)時(shí)、需要積累夠一定數(shù)量的樣本。而且近些年，糧食行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)和國(guó)家市場(chǎng)監(jiān)督管理局頒布、推薦的一系列快速檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)方法中，幾乎都是支持免疫層析技術(shù)的。但值得慶幸的是，酶聯(lián)免疫法檢測(cè)黃曲霉毒素B1和黃曲霉總量寫(xiě)進(jìn)了《中國(guó)藥典》（2020版第三部）中。中藥材真菌毒素污染是近些年大家關(guān)注的重點(diǎn)，而真菌毒素污染對(duì)中藥材質(zhì)量安全的危害是非常致命的。

圖9 勤邦生物黃曲霉毒素B₁檢測(cè)試劑盒

　　事實(shí)上，ELISA試劑盒在飼料質(zhì)量安全檢測(cè)中一直得到很好的應(yīng)用，一旦檢測(cè)樣本超過(guò)十幾個(gè)，其檢測(cè)優(yōu)勢(shì)是非常明顯的。河北伊萊莎生物技術(shù)有限公司是專注真菌毒素ELISA產(chǎn)品的公司之一，由其公司名稱伊萊莎取自ELISA可知。當(dāng)然，談到真菌毒素ELISA檢測(cè)，依然不能缺少華安麥科、蘇微等老牌真菌毒素快檢企業(yè)。

圖10 蘇微的真菌毒素檢測(cè)試劑盒

　?。?）試紙條（檢測(cè)卡）

　　試紙條是真菌毒素快檢市場(chǎng)的主流產(chǎn)品，國(guó)外品牌主要有Romer （被帝斯曼收購(gòu)）和Charm（中檢葆泰代理）；國(guó)內(nèi)知名品牌有華安麥科、易瑞、武漢維士康、維德維康、勤邦、河北伊萊莎等。但不同廠家在技術(shù)上又存在一定差異。就檢測(cè)試紙條來(lái)說(shuō)，以Charm為代表的膠體金產(chǎn)品是三條線，一條C線，兩條T線（其中一條為校準(zhǔn)T線），最后根據(jù)T/C的比值來(lái)定量，通過(guò)雙T線保證產(chǎn)品的穩(wěn)定性。其他廠家大多是兩條線，一條C線，一條T線，定量也是根據(jù)T/C值來(lái)確定。

　　根據(jù)LS標(biāo)準(zhǔn)，應(yīng)用于糧食領(lǐng)域的真菌毒素檢測(cè)試劑需要實(shí)現(xiàn)定量檢測(cè)，這在一定程度推動(dòng)了食品安全免疫層析產(chǎn)品由定性檢測(cè)向定量檢測(cè)發(fā)展。Charm在中國(guó)的代理公司曾推動(dòng)制定了四大真菌毒素膠體金定量檢測(cè)技術(shù)的糧食行業(yè)標(biāo)準(zhǔn) [LST 611（1~4）-2015年]。Charm膠體金定量檢測(cè)試劑最早進(jìn)入我國(guó)糧油真菌毒素檢測(cè)市場(chǎng)，并在相當(dāng)長(zhǎng)的時(shí)間內(nèi)處于壟斷地位，糧食真菌毒素定量試劑一度成為快檢產(chǎn)品中利潤(rùn)最高的。后來(lái)隨著國(guó)內(nèi)食品安全快檢廠家的發(fā)展壯大和技術(shù)進(jìn)步，華安麥科首先分得了第一杯羹，其后更多的企業(yè)開(kāi)始進(jìn)軍糧油檢測(cè)市場(chǎng)，但也帶來(lái)同質(zhì)化競(jìng)爭(zhēng)，產(chǎn)品價(jià)格開(kāi)始明顯下降。而在農(nóng)業(yè)、市場(chǎng)監(jiān)管等其他領(lǐng)域，免疫層析技術(shù)主要以定性為主，企業(yè)競(jìng)爭(zhēng)的市場(chǎng)機(jī)會(huì)受技術(shù)壁壘限制較小。

圖11 Charm真菌毒素檢測(cè)卡、讀卡器和孵育器

　　試紙條需要在檢測(cè)前，加入樣品和金標(biāo)抗體的孵育步驟，以克服檢測(cè)靈敏度不足的問(wèn)題，這是試紙條與檢測(cè)卡的一個(gè)主要差異。因?yàn)檎婢舅貦z測(cè)的前處理過(guò)程，往往稀釋倍數(shù)較高，對(duì)檢測(cè)靈敏度要求更高，所以真菌毒素試劑的產(chǎn)品形式更多是試紙條。

　　近年來(lái)，伊萊莎推出了基于乳膠微球試紙條、手機(jī)版云E測(cè)（相當(dāng)于讀卡儀）和孵育器，實(shí)現(xiàn)對(duì)檢測(cè)過(guò)程最大程度的簡(jiǎn)單化。值得重點(diǎn)強(qiáng)調(diào)的是，乳膠微球與抗體之間是化學(xué)鍵結(jié)合，抗干擾能力更強(qiáng)，穩(wěn)定性和靈敏度更高，有利于建立穩(wěn)定的檢測(cè)體系；乳膠微球的靈敏度雖略低于熒光微球，但檢測(cè)效果可視化、體系更加穩(wěn)定、具有相對(duì)較寬的線性范圍。

圖12 伊萊莎乳膠微球真菌毒素免疫層析檢測(cè)體系

　?。?）時(shí)間分辨熒光定量檢測(cè)卡

　　雖然早在2014年，由李培武院士團(tuán)隊(duì)起草的NY/T 2548-2014，推薦了時(shí)間分辨熒光免疫層析法檢測(cè)飼料及原料中黃曲霉毒素B1。但當(dāng)時(shí)受產(chǎn)品等多種因素的限制，該標(biāo)準(zhǔn)推薦的技術(shù)并沒(méi)有在飼料檢測(cè)行業(yè)得到很好的貫徹和應(yīng)用。

　　近年來(lái)，時(shí)間分辨熒光免疫層析定量法在糧油行業(yè)真菌毒素檢測(cè)領(lǐng)域發(fā)展迅速，代表性事件是“LS/T 6143-2023 糧油檢驗(yàn) 谷物中黃曲霉毒素B₁的測(cè)定時(shí)間分辨熒光免疫層析定量法”于2023年3月頒布，并將于同年9月實(shí)施。北京智云達(dá)科技股份有限公司作為L(zhǎng)S/T 6143-2023唯一的試劑生產(chǎn)企業(yè)申請(qǐng)并參與了該標(biāo)準(zhǔn)的起草。該標(biāo)準(zhǔn)及后續(xù)一系列時(shí)間分辨熒光免疫層析技術(shù)LS/T的頒布實(shí)施，將結(jié)束持續(xù)8年的Charm為代表的膠體金定量檢測(cè)方法在糧食行業(yè)、尤其在招投標(biāo)中的絕對(duì)優(yōu)勢(shì)地位，雖然這兩種免疫層析技術(shù)將在未來(lái)相當(dāng)長(zhǎng)的時(shí)間內(nèi)并行，但其時(shí)代意義不容忽視，甚至可以說(shuō)，對(duì)國(guó)內(nèi)真菌毒素試劑生產(chǎn)有關(guān)企業(yè)來(lái)說(shuō)，這是一個(gè)跨越式的進(jìn)步。

圖13 糧食行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)“LS/T 6143-2023 糧油檢驗(yàn) 谷物中黃曲霉毒素B1的測(cè)定時(shí)間分辨熒光免疫層析定量法”文本首頁(yè)

　　時(shí)間分辨熒光定量檢測(cè)技術(shù)一般采用稀土元素銪（Eu³⁺）作為標(biāo)記物，激發(fā)后熒光猝滅時(shí)間長(zhǎng)，Stokes 位移寬達(dá)270 nm，通過(guò)時(shí)間分辨功能，消除背景熒光及激發(fā)光和發(fā)射光的互相干擾。Eu³⁺被聚苯乙烯納米微球包裹后，再用葡聚糖修飾微球表面，可以大大提升微球的穩(wěn)定性和對(duì)可逆環(huán)境的抗干擾性。因此，熒光定量免疫層析技術(shù)具有準(zhǔn)確度高，穩(wěn)定性和精密度好，線性范圍寬等優(yōu)點(diǎn)。時(shí)間分辨熒光檢測(cè)卡的批內(nèi)、批間差小，檢測(cè)結(jié)果穩(wěn)定，具有很高的檢測(cè)靈敏度，彌補(bǔ)了免疫層析技術(shù)在靈敏度方面的弱勢(shì)。但時(shí)間分辨熒光檢測(cè)卡存在檢測(cè)結(jié)果不直觀的缺點(diǎn)，需要必須借助儀器才能讀出。

　　圖 14 熒光微球示意圖

　　因?yàn)橐环N谷物可能被多種真菌毒素污染，統(tǒng)一前處理過(guò)程或統(tǒng)一提取液是真菌毒素快檢試劑發(fā)展的趨勢(shì)。而且提取液的主要成分也由過(guò)去的乙腈或甲醇，變成對(duì)免疫反應(yīng)干擾小、環(huán)境友好的乙醇。

圖15 維德維康的時(shí)間分辨熒光定量檢測(cè)卡和檢測(cè)儀

　　時(shí)間分辨熒光真菌毒素定量檢測(cè)卡的廠家自上海飛測(cè)（南京微測(cè)）、蘇微、智云達(dá)等開(kāi)始，逐步又出現(xiàn)了維德維康、廣東達(dá)元、北京納迅、勤邦生物、河北伊萊莎等廠家，而且隨著時(shí)間分辨熒光糧食行標(biāo)的頒布實(shí)施，將會(huì)有更多的廠家會(huì)增加產(chǎn)品線。

圖16 伊萊莎生產(chǎn)的時(shí)間分辨熒光定量檢測(cè)卡

　?。?）檢測(cè)儀器和檢測(cè)箱

　　檢測(cè)卡的定量檢測(cè)結(jié)果需要依靠?jī)x器讀出，讀卡儀內(nèi)置標(biāo)準(zhǔn)曲線，可以直接得到待測(cè)樣品中真菌毒素的濃度。目前市場(chǎng)上讀卡儀兼具小型化、便攜化、數(shù)據(jù)聯(lián)網(wǎng)上傳，直接打印等特點(diǎn)，而且發(fā)展趨勢(shì)是多項(xiàng)目同時(shí)檢測(cè)。

　　圖17 北京納迅時(shí)間分辨熒光定量檢測(cè)儀器

　　在儀器小型化的基礎(chǔ)上，廠家從客戶需求著手，將包括前處理在內(nèi)的整個(gè)檢測(cè)過(guò)程所需的設(shè)備耗材，諸如：檢測(cè)試劑、讀卡儀、孵育器、移液器、粉碎機(jī)、計(jì)時(shí)器及各種耗材整合成檢測(cè)箱，成為了一個(gè)移動(dòng)的小型實(shí)驗(yàn)室，檢測(cè)人員使用起來(lái)更加便利。

　　圖18 南京微測(cè)的檢測(cè)箱

　　（6）其他技術(shù)產(chǎn)品

　　真菌毒素快檢產(chǎn)品是食品安全領(lǐng)域最豐富的。除了上述的產(chǎn)品和技術(shù)外，還有北京熱景生物技術(shù)股份有限公司的上轉(zhuǎn)換化學(xué)發(fā)光檢測(cè)卡及拜發(fā)（biopharm）的化學(xué)發(fā)光成像檢測(cè)試劑。

圖19 熱景生物的上轉(zhuǎn)換發(fā)光檢測(cè)卡

　?。?）標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和標(biāo)準(zhǔn)品

　　真菌毒素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)是快檢產(chǎn)品開(kāi)發(fā)和應(yīng)用的前提，是檢驗(yàn)快檢產(chǎn)品準(zhǔn)確度的保障，也是儀器分析和應(yīng)用必須的。真菌毒素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)應(yīng)該是天然陽(yáng)性樣本，不能簡(jiǎn)單的由標(biāo)準(zhǔn)品+空白樣品制備。目前，只有很少的機(jī)構(gòu)獲得真菌毒素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)資質(zhì)，包括國(guó)家糧食和物質(zhì)儲(chǔ)備局科學(xué)研究院和上海農(nóng)科院。商業(yè)化銷售有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（或質(zhì)控樣）主要有Romer公司和普瑞邦。此外，Romer和普瑞邦還擁有豐富的真菌毒素標(biāo)準(zhǔn)品，包括同位素內(nèi)標(biāo)。