DNA損傷的三種分子生物檢測方法
DNA是攜帶生物體遺傳信息的重要分子，它的完整性對細(xì)胞存活至關(guān)重要。然而，在生命活動中，DNA時刻遭受著內(nèi)源性（氧化自由基、復(fù)制叉崩塌等）或外源性（電離輻射、烷化劑等）刺激，DNA損傷不可避免。
檢測DNA損傷的方法有很多，根據(jù)其原理大致可以分為3類：?基于損傷DNA理化性質(zhì)的改變檢測DNA損傷、基于分子雜交檢測DNA損傷以及基于DNA損傷后形成的產(chǎn)物檢測DNA損傷。前兩種方法是基于熒光標(biāo)記直接觀測DNA的損傷情況，而基于DNA損傷后形成的產(chǎn)物檢測DNA損傷是通過標(biāo)記物的檢測間接反映DNA的損傷程度。
| 檢測原理 | 檢測技術(shù) | 所檢測DNA損傷類型 |
| 基于損傷DNA理化性質(zhì)的改變檢測 | 彗星實(shí)驗(yàn) | 鏈斷裂及堿不穩(wěn)定位點(diǎn) |
| 基于分子雜交檢測 | 熒光原位雜交法 | 鏈斷裂 |
| 基于DNA損傷后形 成產(chǎn)物檢測 |
yH2AX | 鏈斷裂 |
| 8-OHdG | DNA化學(xué)修飾 | |
| TUNEL | 細(xì)胞凋亡所致DNA鏈斷裂 |
※?基于DNA損傷后形成產(chǎn)物進(jìn)行檢測
DNA損傷過程中可形成某些特定的損傷產(chǎn)物，可通過檢測損傷產(chǎn)物（磷酸化H2AX、8-OHdG等）來評估DNA損傷。也可標(biāo)記損傷DNA，如末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的脫氧尿苷三磷酸標(biāo)記（terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick end labeling，TUNEL），通過標(biāo)記物的檢測間接反映DNA的損傷程度。
1.雙鏈斷裂標(biāo)志物磷酸化H2AX檢測法
H2AX是組蛋白H2A家族成員之一，包含一個進(jìn)化保守區(qū)域SQ位于真核細(xì)胞的C末端，分子量為14KD，139位有個絲氨酸殘基，在細(xì)胞發(fā)生DNA雙鏈斷裂后的數(shù)分鐘內(nèi)，將會被ATM,ATR和PRKDC磷酸化，形成γH2AX，進(jìn)而迅速招募DNA修復(fù)蛋白和凋亡蛋白到損傷部位，每個雙鏈的斷裂區(qū)會有成百上千的γ-H2AX，然后在1h左右數(shù)量和密度達(dá)到峰值。由于γH2AX的出現(xiàn)與DNA雙鏈斷裂緊密關(guān)聯(lián)，是目前國內(nèi)外研究細(xì)胞DNA雙鏈斷裂應(yīng)激反應(yīng)的熱點(diǎn)之一，同時也可以作為DNA雙鏈斷裂的標(biāo)志物。
由于與DNA雙鏈斷裂緊密相關(guān)，γH2AX可以作為雙鏈修復(fù)的標(biāo)志物
H2AX&γH2AX相關(guān)抗體：
| 類型 | 貨號 | 名稱 | 應(yīng)用 |
| H2AX抗體 | MAB20144 | H2AFX monoclonal antibody, clone BIA-8 | WB-Ce、IHC-P、ICC、IF、IP |
| MAB12802 | Histone H2AX monoclonal antibody, clone RM214 | WB-Ce、ICC、ELISA | |
| PAB8764 | H2AFX polyclonal antibody | WB-Ce、IHC、IP | |
| γH2AX抗體 | MAB15279 | Histone H2AX (phospho S139) monoclonal antibody, clone 2A9-B5 | WB-Ce、IF |
| MAB15111 | Histone H2AX (phospho S139) monoclonal antibody, clone RM224 | WB-Ce、ICC、IF | |
| MAB21809 | H2AFX (phospho S139) monoclonal antibody | WB、?IHC-P、?IF、?IP |
2.氧化損傷標(biāo)志物8-OHdG檢測法
DNA氧化損傷產(chǎn)物中，作為DNA中脫氧鳥苷（dG）的羥基加合物，8-羥基脫氧鳥苷（8-OHdG）因其形成量大，影響因素少，已被公認(rèn)為最能反映體內(nèi)DNA氧化損傷程度的生物標(biāo)志物。
3.DNA斷片標(biāo)記法
原位末端標(biāo)記法（TdT-mediated dUTP nick end labeling，TUNEL）是一種檢測凋亡細(xì)胞DNA鏈斷裂片段的方法。細(xì)胞凋亡發(fā)生時，內(nèi)源性核酸內(nèi)切酶將DNA降解成片段，在脫氧核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶的作用下，底物dUTP 或BrDU(無或有熒光標(biāo)記)可連接到DNA斷片的3-OH末端，采用熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀對標(biāo)記物進(jìn)行分析，實(shí)現(xiàn)在單細(xì)胞水平檢測凋亡細(xì)胞的DNA碎片。
